La influencia del pH en medios de cultivos

El pH es un parámetro cuyo control es indispensable, ya que el potencial de hidrógeno impacta en los medios de cultivo, por ejemplo, en su apariencia física o en el desarrollo de ciertos microorganismos. En la mayoría de los casos, las bacterias proliferan si el pH oscila entre 6.5 y 7, en cambio, el crecimiento de las células animales requiere un pH entre 7.2 y 7.4. Para evitar variaciones drásticas y obtener los resultados esperados en los medios, es indispensable utilizar el medidor de pH.

Los medios de cultivo y la importancia de un buen nivel de pH

Dentro de los laboratorios son cultivados varios microorganismos en ambientes favorables para su crecimiento, ya sean bacterias, células animales y vegetales, levaduras u hongos. Al resultado de esta acción se le conoce como medio de cultivo o crecimiento y son indispensables en muchas pruebas microbiológicas.

Con el fin de fomentar el crecimiento y supervivencia de los microorganismos, se añaden varios agentes a los medios con ayuda de equipo de laboratorio en Monterrey, por ejemplo, fuentes de energía, minerales, promotores de crecimiento, sales, metales, agar, solidificantes, entre otros. Los medios pueden prepararse de manera interna al mezclar los agentes o comprarse en versión deshidratada.

Según la concentración de agente gelificante o solidificante, es posible formar medios líquidos (como caldos) o sólidos y semisólidos (como placa de agar). Igualmente, hay diferentes diseños de medios para distintas aplicaciones y tipos de microorganismos. La composición nutricional adecuada y los equipos de medición usados en laboratorios de biología son indispensables para la obtención de los medios, no obstante, igual es crucial un pH correcto y estable.

Como mencionamos, las bacterias suelen crecer si el pH está entre 6.5 y 7. Estos microorganismos suelen liberar elementos ácidos que obstruyen su crecimiento, por lo que se añaden buffers a los medios, de modo que el pH sea estable. En el caso de los medios deshidratados, su pH es ajustado por los fabricantes de modo que, al enfriarse a 25 °C, los valores de potencial de hidrógeno de los medios terminados se ajusten a la información contenida en las etiquetas.

Ahora bien, es necesario someter a los medios a controles de calidad. La utilización de un medidor de pH es la prueba de control químico más importante, debido a la influencia del potencial de hidrógeno en el rendimiento de los medios. En caso de que este parámetro no esté en el rango adecuado, no crecerán los microorganismos y ocurrirán varios cambios físicos, por ejemplo, la gelificación del agar y la precipitación de los componentes.

Las pruebas rutinarias de pH se aplican igual en medios sólidos, semisólidos y líquidos y, para ello, es posible recurrir a la medición de pH por electrodos tras una calibración correcta con buffers de pH. Con respecto a los instrumentos más usados en medios de cultivo, principalmente en placas de agar, se usan los electrodos de pH planos, de punta plana y de superficie plana.

La unión de referencia del electrodo plano y la membrana del sensor se construyen en la punta de la superficie plana del electrodo. Se trata de una configuración ideal para determinar el pH de muestras líquidas, de pequeñas gotas y superficies húmedas de cualquier tipo de muestra, por ejemplo, queso, piel, papel, tela, hojas, masa, carne, entre otros. 

¿Cómo se miden las muestras?

Es importante que la medición del pH en medios se realice a temperatura ambiente, es decir, entre 20 y 25 °C, aunque hay casos donde esto varía, según los fabricantes. Es importante que las muestras y buffers tengan la misma temperatura para garantizar la precisión de los resultados.

Otro punto relevante es comprobar el pH de los medios que se preparen dentro del laboratorio y, en caso de requerirse, hacer ajustes con HCI 1M o NaOH 1M antes de esterilizarlos. Tras la esterilización, se tiene que revisar el pH, ya que hay riesgos de variaciones. En el caso de los medios deshidratados, no suelen requerir ajustes si son preparados correctamente, por tal motivo, es posible corroborar el pH únicamente de una muestra de medio esterilizado. Con respecto a los medios basados en agar, es necesario medir el pH de la muestra solidificada.

Consideren los siguientes puntos para una correcta medición:

• Para medir el pH, pongan en contacto a la superficie de la muestra del medio con la punta del electrodo plano. Asegúrense que el contacto sea efectivo.
• El medidor de pH mostrará la temperatura como el pH, que tienen que registrar una vez estabilizados.
• Revisen la literatura relacionada para saber cuál es rango adecuado de pH para el medio. En el caso de medios deshidratados, chequeen el etiquetado para corroborar que el pH está dentro del límite recomendado.
• Usen agua desionizada o destilada para limpiar la punta del electrodo antes de que midan otra muestra. Posteriormente, sequen con un trapo limpio y suave.
• Eliminen correctamente las muestras al finalizar las mediciones.

En El Crisol encontrarán un amplio catálogo de material de laboratorio en Monterrey para la creación y medición de medios. Si desean más información, contáctennos al (81) 8123 4220 o escríbannos a la dirección: monterrey@elcrisol.com.mx.